يمكن التعرف على الكربوهيدرات (السكريات) في المختبر من خلال التفاعلات الملونة المميزة (موليش، اليود، فيهلينج، بارفويد، سيليوانوف، بيال). يتفاعل النشا (الأميلوز + الأميلوبكتين) مع اليود ويمكن اكتشافه بسهولة.
لمعرفة ما إذا كان الطعام يحتوي على كربوهيدرات بسيطة أو سكر معقد مثل النشا (أميلوز + أميلوبكتين)، يسمح اختبار موليش، أولاً وقبل كل شيء، باكتشاف السكر (وليس أي شيء آخر). يساعد اختبار اليود في تحديد ما إذا كانت الكربوهيدرات عبارة عن نشا وتستمر عملية التحديد وفق المفتاح التالي حيث يتم استغلال خاصية السكريات لتكوين الفورفورال: انظر الفيديو التوضيحي
In the laboratory training, carbohydrates (sugars, glucides) are identifiable by characteristic colored reactions (Molish, Iodine, Fehling, Barfoed, Seliwanoff, Bial). Starch (amylose + amylopectin) reacts with iodine and can be easily detected.
فيديو توضيحي Explanatory video
1. إختبار
موليش للكشف عن السكريات Molish's test to detect carbohydrates
الهدف من االاختبار هوالكشف عن كل ما هو سكر (كربوهيدرات) وإلغاء فرضية الدهنيات والبروتينات.بإمكان اختبار موليش أن يعطي إيجابية مع البروتينات السكرية. سلبية اختبار موليش (غياب خاتم بنفسجي في الأنبوب) تدل على عدم وجود سكريات. انظر الشكل التالي للكشف عن مختلف السكريات.
في وسط حمضي مركز و تحت حرارة عالية، يتفاعل حمض الكبريت المركز (Concentrated sulfuric acid) مع السكر الخماسي (Pentose) والسكر السداسي (Hexose) ويزيل بعض جزيئات الماء، إذ ينتج الفورفورال (Furfural) من السكر الخماسي وهيدروكسي ميثيل فورفورال (Hydroxymethylfurfural) من السكر السداسي
(أنظر الرسم). ويمكن لكل منهما أن يتفاعل مع الفا نافتول حيث يتكون مركب أحمر
بنفسجي يظهر كحلقة بين سطحي الانفصال طريقة العمل (Methods)
- قم بتحضير 4 أنابيب و ضع فيها 2 مل من الجلوكوز(1%) أو الفروكتوز(1%) أو السكروز(1%) أو الماء
المقطر(شاهد)، فقط. - أضف قطرتين من محلول كاشف موليش إلى كل الأنابيب ثم حركها لخلط المحتويات. - أضف بحذر حوالي 1 مل من حمض الكبريت المركز على حافة الأنبوب بحيث تتكون طبقتان. لاحظ اللون البنفسجي الموجود بين الطبقتين بشكل حلقة. النتائج: إيجابية موليش (وجود سكريات) تظهرعلى شكل حلقة بنفسجية بين طبقتي حمض الكبريت والمحلول السكري. كاشف الإختبار: كاشف موليش يتكون من 2 غرام من ألفا نفتول (alpha-naphtol) محلول في 100 مل إيتانول.
2.
اختباراليود للكشف عن النشا والكليكوجين Iodine test to detect starch and glycogen
تعطي السكريات العديدة مع اليود معقد ملون. يعطي النشا لوناً أزرقا مع اليود، بينما يتكون لون بني محمر مع الكليكوجين. بحضور سكريات أخرى ، غير النشا والكليكوجين، يعطي اليود لونا أصفرا المواد (Materials)
- محلول اليود: يضاف 1 غ من اليود و 2 غ من يود البوتاسيوم إلى 100 مل من الماء
المقطر.
- السكريات: محاليل %1 في الماء من الجلوكوز، النشا و الكليكوجين.
- حمض HCl 1N. طريقة العمل (Operating method)
- قم بتحضير 4 أنابيب وضع فيها 2 مل من سكر الجلوكوز ب 1% (أنبوب 1) و النشا (أنبوب 2) و الكليكوجين
(أنبوب 3). ضع 2 من الماء المقطر(شاهد) في الأنبوب الرابع (4).
- أضف 1 مل من حمض HCl 1N لكل أنبوب.
- أضف قطرتين من محلول اليود لكل أنبوب.
- لاحظ تغيرلون كل أنبوب النتائج: إيجابية اليود (وجود سكريات عديدة) تظهراللون الأزرق مع النشا، بينما يكون اللون بني محمرمع الكليكوجين.
3. اختبار
فيهلينغ للكشف عن السكريات المختزلة Fehling's test for the detection of reducing sugars
في وسط قاعدي و مع التسخين، تتأكسد السكريات الأحادية (والسكريات العديدة، في بعض الحالات) و تقوم باختزال عناصر كيميائية أخرى، في نفس الوقت. تعود هذه الخاصية لوجود وظيفة هيمي أسيتال حرة، يحملها السكر. تعطي السكريات المختزلة مع كاشف فيهلينغ (كبريتات النحاس) راسب أحمر آجري من أكسيد النحاسي. المواد
(Materials)
- محلول فيهلينغ A: يحل 35 غ من CuSO4.5H2O
+ 5 مل من H2SO4
+ الماء ليكمل الحجم إلى 1000 مل.
- محلول فيهلينغ B: يحل 150 غ من طرطرات الصوديوم
والبوتاسيوم زئد 300 مل من NaOH (10%) + الماء ليكمل الحجم إلى 1000 مل.
- كاشف فيهلينغ: يمزج حجم متساو من محلول فيهلينغ A ومحلول فيهلينغ B, هذا الكاشف
يحضر مباشرة قبل البدء بالعمل.
- السكريات: محاليل %1 في الماء من الجلوكوز، الفروكتوز، ريبوز، سكروز و مالتوز. طريقة
العمل (Methods)
- قم بتحضير 6 أنابيب و ضع فيها 1 مل من محلول A و 1 :مل من محلول B لكاشف فيهلينغ.
- أضف 2 مل من سكر الجلوكوز ب 1% (أنبوب 1) و الريبوز (أنبوب 2) و الفروكتوز (أنبوب 3)، و السكروز (أنبوب 4) و المالتوزز (أنبوب 5). ضع 2 من الماء المقطر(شاهد) في الأنبوب السادس (6). قم بتحريك جميع الأنابيب لخلط المحتويات.
- المالتوزز (أنبوب 5). ضع 2 من الماء المقطر(شاهد) في الأنبوب قم بتسخين الأنابيب في حمام مائي غالٍ لمدة
3 دقائق.
- لاحظ تغيرلون كل أنبوب النتائج: إيجابية كاشف فيهلينغ (وجود سكريات مختزلة) تظهر بتشكل راسب أحمر آجري.
4. اختبار بارفود للتمييز بين السكريات الأحادية والسكريات الثنائية المختزلة Barfoed's test to distinguish between reducing monosaccharides and disaccharides
يمكن أختبار بارفود من التمييز بين السكريات الأحادية والسكريات الثنائية، وذلك من خلال سرعة ظهور راسب أحمر (أكسيد النحاسي)، إذ تعطي السكريات الأحادية هذا الراسب خلال 5 دقائق، في حين تحتاج السكريات الثنائية إلى 7-12 دقيقة. بالطبع، لا تعطي السكريات غير المختزلة أي راسب أحمر. مع الاختزال، تتغير كمية الراسب الأحمر تناسبيا مع كمية السكر. المواد (Materials)
- كاشف بارفود: يحل 13.3 غ من أسيتات النحاس إلى 200 مل من الماء، ويضاف إليها 8 مل من حمض الخل الثلجي - لون أزرق.
- السكريات: محاليل %1 في الماء من الجلوكوز، المالتوز و السكروز. طريقة العمل (Methods)
- قم بتحضير 4 أنابيب و ضع فيها 1 مل من محلول كاشف بارفود.
-أضف 1 مل من سكر الجلوكوز (أنبوب 1) والمالتوز (أنبوب 2) و السكروز (أنبوب 3). ضع 1 من الماء
المقطر(شاهد) في الأنبوب الرابع. قم بتحريك جميع الأنابيب لخلط المحتويات.
- قم بتسخين الأنابيب في حمام مائي غالٍ و لاحظ تغير لون كل أنبوب مع احتساب الوقت. قف عن التسخين بالنسبة للأنابيب التي أظهرت لونا أحمرا آجري و تابع التسخين بالنسبة للأنابيب الأخرى.
إيجابية التفاعل: إيجابية كاشف بارفود (وجود سكريات مختزلة أحادية أو ثنائية) تتمثل في تكون راسب أحمر آجري في ظرف 5 دقائق في حالة السكريات الأحادية أو 7-12 دقيقة، بالنسبة للسكريات الثنائية.
Share this information on social media تبادل المعلومة عبر المواقع الإجتماعية
5. إختبار سيليفانوف للكشف عن السكريات الحاملة لوظيفة كيتون Seliwanoff's test to detect sugars carrying ketone function
عكس السكريات الألدهيدية تتميز السكريات الكيتونية بكونها تفقد الماء بسرعة أكبر حيث تكون الفورفورال بسهولة أكثر. ويتكثف الفورفورال مع الريزوسينول ليشكل معقدا أحمراللون (أحمر كرزي ، Red cherry, rouge cerise) المواد (Materials)
كاشف الاختبار: يتكون كاشف سيليفانوف من 2 غرام من الريزورسينول (Resorcinol) و33 مل من حمض الكلور هيدريك (Chlorhydric acid, HCl) المركز، زائد 100 مل من الماء المقطر .
- السكريات: محاليل %1 في الماء من الجلوكوز، المالتوز و السكروز. طريقة العمل (Methods):
- قم بتحضير 4 أنابيب و ضع فيها 2 مل من الفروكتوز (أنبوب رقم 1)، 2 مل من المانوز (أنبوب رقم 2)، 2 مل من السكاروز (أنبوب رقم 3) و 2 مل من الماء المقطر(أنبوب رقم 4، شاهد).
- أضف لكل أنبوب 2 مل من كاشف سيليفانوف.
- أضف لكل أنبوب 2 مل من HCl المركز.
- قم بتسخين الأنابيب لمدة 5 دقائق في ماء يغلي ثم اترك الأنابيب تبرد و لاحظ لون كل أنبوب.
- إيجابية التفاعل: إيجابية اختبار سيليفانوف تتمثل في ظهور لون أحمر كرزي عند سكريات الكيتوز.
6. اختبار بيال للكشف عن السكريات الخماسية Bial's test to detect pentoses
أساس الاختبار (Principle of the test)
مع كاشف بيال تعطي السكريات الخماسية لونا أخضر مزرق، بينما تعطي السكريات السداسية لونا بنيا مصفرا (أنظر الشكل الملخص لنتائج الكشوفات). المواد (Materials)
- كاشف بيال: 0,2 غ من الأورسينول في 100 مل من حمض الكلوريدريديك المركز، ويضاف 5 قطرات من محلول كلوريد الحديد (FeCl3) 10%.
- السكريات: محاليل %1 في الماء من الجلوكوز والريبوز. طريقة العمل (Methods)
- قم بتحضير 3 أنابيب و ضع فيها 1 مل من محلول بيال.
- أضف 1 مل من سكر الجلوكوز (أنبوب 1) و الريبوز (أنبوب 2). ضع 1 من الماء المقطر(شاهد) في الأنبوب الثالث (3). قم بتحريك جميع الأنابيب لخلط المحتويات.
- قم بتسخين الأنابيب في حمام مائي غالٍ و لاحظ تغير لون كل أنبوب
إيجابية كاشف بيال: ظهور لون أخضر يرمز لوجود سكريات خماسية.
اختبار - Quiz
سؤال 1 للكشف عن كل ما هو سكر في محلول ما نستعمل اختبار: To detect all that is sugar in a solution we use the test:
(!اختبار بارفود - Barfoed's test)(!اختبار اليود - Iodine test)(!اختبار سيليفانوف- Seliwanoff's test)(اختبار موليش- Molish's test)
سؤال 2 للكشف عن كل ما اعتمادا على نتائج اختبار سيليوانوف واختبار بيال فإن السكر x هو (انظر الشكل): Referring to the results of the Seliwanoff test and the Bial test (see figure), the sugar x is:
(!جلوكوز - Glucose)(!فروكتوز - Fructose)(!نشا- Starch)(!كزيلوز- xylose)(ريبولوز- Ribulose)(!ريبوز- Ribose)
تفاصيل الإجابات - Response details:
سؤال 1: اختبار موليش الإيجابي يشير إلى وجود السكريات. أما اختبارات سيليفانوف وبرفود واليود الإيجابية فتشير إلو وجود الكيتوز والسكريات المختزلة والنشا، بالتتالي. سؤال 2: اختبار سيليفانوف الإيجابي (لون أحمر كرزي) يشير إلى وجود الكيتوز، كان سداسيا أو خماسيا أو غيره. اختبار بيال الإيجابي (لوز أخضر) يشير إلى وجود سكر خماسي. ما هو السكر الكيتوخماسي (Ketopentose) إذا؟
السكر الكيتوخماسي الوحيد في الاقتراحات هو الريبولوز. أما الريبوز والكزيلوز فهي سكريات ألدخماسية (Aldopentoses). الجلوكوز والفروكتوز سكريات سداسية.
دعم الثقافة العلمية و مواكبة الانتقال من الثانوية إلى الجامعة
لكي نتمكن من الاستمرار في خدمة الزوار ، دعم موقعنا من خلال اقتناء الكتب والمواد التعليمية التي تهدف إلى تحسين التدريس والبحث العلمي في الكيمياء الحيوية
Adresse
Faculty of Sciences, Cadi Ayyad University Marrakech, 40000, Morocco
